一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

選用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，雌雄不限，周齡為6-8周。

二、造模具體操作步驟

1. 術(shù)前準(zhǔn)備：造模手術(shù)前2小時(shí)，對(duì)大鼠腹腔注射青霉素鈉2×10?U，以此達(dá)到抗炎目的。

2. 麻醉、消毒與固定：完成相應(yīng)準(zhǔn)備工作。

3. 胸椎T10節(jié)段定位：用手觸摸大鼠背部，先找到胸椎最高點(diǎn)，從該點(diǎn)往上數(shù)3個(gè)棘突對(duì)應(yīng)的椎體位置，即為胸椎T10節(jié)段。

4. 背部切口操作：在T9-T11節(jié)段對(duì)應(yīng)的背部位置，做正中直切口。隨后使用止血鉗，以鈍性分離的方式，將開口處皮膚與肌肉層之間的黏膜分離開。

5. 暴露手術(shù)區(qū)域：借助輔助固定鉤將兩側(cè)皮膚拉開，使手術(shù)區(qū)肌肉視野充分展現(xiàn)。用眼科剪在中線（棘突邊緣）兩側(cè)的肌肉上做直切口。若出現(xiàn)少量出血情況，用棉簽清理手術(shù)區(qū)域。接著，用眼科剪剪掉T9-T11節(jié)段區(qū)域的棘突以及其他少量多余的肌肉組織，讓T9-T11節(jié)段的椎板完全暴露出來(lái)。

6. 脊髓背側(cè)暴露：去除兩側(cè)關(guān)節(jié)突，使脊髓背側(cè)呈現(xiàn)出直徑約0.5cm的圓形暴露區(qū)域。需要注意的是，暴露范圍必須大于選用的撞擊頭直徑，且不能有骨突殘留，避免重物自由下落時(shí)受到周圍組織的遮擋。

7. 打擊器位置與高度調(diào)整：把自由落體打擊器的位置調(diào)整到使撞擊頭移動(dòng)至脊髓背側(cè)需要打擊的實(shí)驗(yàn)位置，之后再對(duì)打擊器的垂直高度進(jìn)行調(diào)整。調(diào)整至撞針球面剛好貼住脊髓骨膜，然后讓其自由抬高到合適位置（撞擊頭抬高2-3mm）。

8. 砝碼放置與定位：在撞擊針上方2.5cm高度處插入定位銷，挑選合適的砝碼（10g）放入金屬打擊管內(nèi)。

9. 實(shí)施打擊：迅速拔出定位銷，讓砝碼以自由落體的方式撞擊撞擊針，從而產(chǎn)生25gcf的致傷能量。

10. 術(shù)后初步觀察：迅速移開自由落體打擊器后，仔細(xì)觀察大鼠的心跳和呼吸情況，確保無(wú)異?，F(xiàn)象。

11. 縫合與抗感染處理：按照肌肉、筋膜、皮膚的順序依次進(jìn)行縫合，縫合完成后用碘伏對(duì)切口及周圍進(jìn)行消毒處理。在傷口周邊撒上青霉素粉劑，預(yù)防感染。

三、成模鑒定方法

1. 行為觀察：撞擊后若觀察到大鼠軀體出現(xiàn)顫抖，鼠尾呈現(xiàn)痙攣性擺動(dòng)，雙下肢先迅速回縮撲動(dòng)，隨后癱瘓，并且肉眼可見脊髓硬膜下有血腫形成，表明造?？赡艹晒?。假手術(shù)組大鼠僅進(jìn)行棘突和椎板切除術(shù)，不開展SCI造模操作。

2. BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分法：觀察時(shí)長(zhǎng)設(shè)定為4min，在125cm×125cm的空間范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)分。采用三人盲法，在評(píng)分前對(duì)評(píng)分人員進(jìn)行培訓(xùn)，使其深入掌握評(píng)分細(xì)則與標(biāo)準(zhǔn)。三位評(píng)分人員在同一時(shí)刻獨(dú)立觀察大鼠雙后肢的運(yùn)動(dòng)功能，并做好記錄與評(píng)分，最終選取三個(gè)評(píng)分中的最低值作為功能評(píng)分結(jié)果。BBB評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)說(shuō)明如下：0-7分，重點(diǎn)關(guān)注關(guān)節(jié)是否活動(dòng)以及活動(dòng)關(guān)節(jié)的數(shù)量；8-14分，主要看腳掌能否接觸地面，著地后能否進(jìn)行運(yùn)動(dòng)以及運(yùn)動(dòng)是否協(xié)調(diào)；15-18分，著重觀察腳尖能否抓地，腳尖方向與前進(jìn)方向是否一致，前后肢運(yùn)動(dòng)是否協(xié)調(diào)；19-21分，主要判斷運(yùn)動(dòng)時(shí)軀干是否穩(wěn)定，尾巴是否上翹。

3. Rivlin斜板試驗(yàn)：采用改良的Rivlin方法，使用一塊預(yù)先粘貼好3mm厚橡膠墊的長(zhǎng)方形木板作為斜板，該斜板通過(guò)與底板連接的鉸鏈實(shí)現(xiàn)旋轉(zhuǎn)，以此調(diào)節(jié)斜板傾斜的角度。將大鼠放置在斜板上，使其頭部朝前，身體長(zhǎng)軸線與斜板的縱軸垂直。檢測(cè)從水平位置（0°）起始，每次將斜板旋轉(zhuǎn)升高5°，逐步增大斜板與水平面之間的角度，記錄大鼠能夠停留5秒的最大角度，該角度即為其功能角度值。正常情況下，大鼠維持身體停留5秒時(shí)，斜板的傾斜角度約為73°。

4. HE染色：仔細(xì)且完整地取出傷段及頭尾段共1.0cm的脊髓組織，將其放入預(yù)先裝有4%多聚甲醛的離心管中，固定24小時(shí)后進(jìn)行HE染色，隨后在光鏡下觀察脊髓損傷區(qū)及鄰近部位的病理變化情況。

四、造模周期

整個(gè)造模周期為3天。

五、后續(xù)檢測(cè)指標(biāo)建議

仔細(xì)游離并完整取出傷段及頭尾段共1.0cm的脊髓組織，放入預(yù)盛有4%多聚甲醛的離心管中固定24小時(shí)，HE染色后光鏡觀察脊髓損傷區(qū)及鄰近部位的病理變化。

六、注意事項(xiàng)

1. 體溫維持：術(shù)后大鼠體溫通常較低，需將其放置在體溫維持儀上，保證體溫穩(wěn)定。

2. 排尿護(hù)理：給大鼠進(jìn)行排尿護(hù)理時(shí)，先用手指觸摸找到充盈的膀胱，接著按住膀胱底部，按照自上而下的方向輕輕擠壓，促使尿液排出。擠壓過(guò)程要保持耐心、動(dòng)作輕柔，嚴(yán)禁粗暴用力。若尿液擠出困難，可用溫水適度刺激膀胱區(qū)及外生殖器。同時(shí)要避免對(duì)尿道區(qū)及外生殖器進(jìn)行不當(dāng)?shù)臋C(jī)械刺激，防止出現(xiàn)尿道水腫及外生殖器水腫翻出的情況，并定期做好清潔工作。

3. BBB評(píng)分注意事項(xiàng)：進(jìn)行BBB評(píng)分前，務(wù)必先將大鼠尿液排凈，防止影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。評(píng)分時(shí)要認(rèn)真、細(xì)致地觀察大鼠四肢的行走狀況，并做好記錄。

4. 術(shù)后全面護(hù)理：術(shù)后將動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，保證自然光照和通風(fēng)良好。每天更換清潔、干燥的墊料，始終保持環(huán)境干燥。密切觀察動(dòng)物的精神狀態(tài)、飲食情況、排尿排便狀況、有無(wú)肢體水腫和壓傷、有無(wú)泌尿系統(tǒng)血性分泌物等。每日進(jìn)行3次人工排尿，腹腔注射青霉素，劑量為10萬(wàn)U/次，每天2次。注意防止大鼠出現(xiàn)自殘行為以及腸梗阻現(xiàn)象。

5. 模型調(diào)整：模型嚴(yán)重程度可依據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求，通過(guò)調(diào)整撞擊次數(shù)、撞擊高度來(lái)實(shí)現(xiàn)。建議在正式實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最合適的參數(shù)設(shè)置。